特殊な冷却装置または液体窒素は、凍死させた幼虫（FKB）アッセイにおける幼虫死亡率を標準化する主要なメカニズムとして機能します。 密閉された円形領域内の温度を急速に下げることにより、この方法は死んだ蓋をした幼虫の制御されたゾーンを作成し、幼虫の細胞を機械的に損傷することなく、コロニーの衛生応答速度を測定するための均一な刺激を提供します。
核心的な洞察 液体窒素を使用する真の価値は、幼虫の皮膚を破裂させることなく自然な幼虫の死をシミュレートできる能力にあります。これにより、働き蜂は漏れ出る体液ではなく、死んだ幼虫自体の匂いによって誘発されるため、コロニーの遺伝的な社会的免疫と病気耐性をより正確に測定できます。
アッセイの仕組み
制御された殺傷ゾーンの確立
FKBアッセイでは、「特殊な装置」は、PVCパイプや工業用金属チューブなどのシリンダーの形をとることがよくあります。この装置を巣板に押し当てて、蓋をした幼虫の特定の円形パッチを分離します。
低温剤の封じ込め
シリンダーは二重の目的を果たします。テストエリアを定義し、液体窒素を物理的に閉じ込めます。これにより、低温液体が巣板全体に蒸発したり、周囲の細胞に広がったりするのを防ぎ、標的となった幼虫のみが安楽死させられ、残りの巣の構造は効果的に損傷を受けないままになります。
均一な刺激の提供
シリンダー内に液体窒素を注ぎ、急速かつ深い凍結を誘発します。これにより、リング内のすべての幼虫が即座に同時に死滅することが保証され、手動の方法では再現できない実験の標準化された「スタートライン」が作成されます。
凍結が機械的方法よりも優れている理由
血リンパの漏出の防止
機械的方法（ピン殺しなど）よりも液体窒素を使用する重要な利点は、幼虫の物理的完全性を維持することです。機械的な穿刺は血リンパ（昆虫の血液）の漏出を引き起こし、蜂が損傷を「容易に」識別できる強力で人工的な嗅覚手がかりを提供します。
真の嗅覚感度のテスト
凍結は幼虫を皮膚や蓋を穿刺することなく殺すため、体液は漏れ出しません。働き蜂は、腐敗の微妙な化学的シグナルまたは生命徴候の欠如を通じて死を検出する必要があります。
高性能遺伝子の選択
この方法は、優れたコロニーを平均的なコロニーから分離します。非常に敏感な衛生行動を持つコロニーのみが、凍死した幼虫を迅速に検出し除去するため、病気耐性に焦点を当てた育種プログラムにとって、これはゴールドスタンダードとなります。
トレードオフの理解
ロジスティクスの複雑さ
科学的には優れていますが、FKB法では液体窒素へのアクセスと、低温物質を取り扱うための特殊な安全装備が必要です。これにより、単純なピンテスト方法と比較して、現場での実施がより煩雑で高価になります。
偶発的な損傷の可能性
シリンダーが巣板に対して適切に密閉されていない場合や、液体窒素が過剰に適用された場合、熱損傷が周囲の健康な幼虫に広がる可能性があります。これにより、衛生行動（HB）値の計算を歪める可能性のある変数が導入されます。
目標に合った正しい選択をする
液体窒素の使用は、単に幼虫を殺すことだけではありません。収集するデータが遺伝的に重要であることを保証することです。
- 病気耐性のための育種が主な焦点である場合： 漏れ出る体液への反応ではなく、嗅覚感度を対象としていることを確認するために、液体窒素FKBアッセイに依存してください。
- 標準化されたデータ収集が主な焦点である場合： 手動での穿刺力と深さに関連する人間のエラーを排除するために、FKB方法を使用してください。
- 機器なしでの迅速な現場スクリーニングが主な焦点である場合： ピン殺しは容易ですが、コロニーの真の衛生的なニュアンスに関して偽陽性を生み出す可能性があることを認識してください。
コロニーの弱った幼虫を検出して除去する自然な能力の、妥協のない、ノイズのない評価が必要な場合は、FKBアッセイを使用してください。
概要表：
| 特徴 | 凍死幼虫（FKB） | 機械的ピン殺し |
|---|---|---|
| メカニズム | 液体窒素による急速な低温凍結 | 針による物理的穿刺 |
| 幼虫の完全性 | 無傷のまま；体液の漏出なし | 皮膚が破裂；血リンパの漏出 |
| 検出タイプ | 微妙な嗅覚化学的シグナル | 強力な人工体液シグナル |
| 遺伝的精度 | 高（真の社会的免疫を測定） | 中（偽陽性を生じる可能性がある） |
| 複雑さ | 高（低温装備が必要） | 低（簡単な現場ツール） |
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参考文献
- М. Д. Каскинова, А. Г. Николенко. Genetic markers for the resistance of honey bee to Varroa destructor. DOI: 10.18699/vj20.683
この記事は、以下の技術情報にも基づいています HonestBee ナレッジベース .
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